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《Western Blot操作手册》-超详细发布时间:2018-01-21   备注:   作者:admin   点击:389 次

long8公司自己编写的《Western Blot操作手册》,走实战出发,针对Western Blot实验过程中的各种细节做了详细的介绍,其中包含了大量的“问题分析”,是一本系统的实践操作手册,希望能给广大科研工作者带来方便。

                                               

1 Western Blot简介

1.1 Western Blot原理

1.2 Western Blot优点

1.3 Western Blot应用

1.4 Western Blot成功要素

2 Western Blot基本流程

2.1 蛋白样品的提取

2.1.1 通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白

2.1.2 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白

2.1.3 裂解液的选择

2.2 蛋白样品的定量

2.3 蛋白样品的变性

2.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE

2.4.1 SDS-PAGE基本原理

2.4.2 PAGE:聚丙烯酰胺凝胶

2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶分类

2.5 转膜(Trarsmembran

2.5.1 转膜的定义

2.5.2 转移膜的选择

2.5.3 转膜步骤(以槽式湿转为例)

2.5.4 转膜注意事项

2.5.5 转膜后检测(此步可以省略)

2.6 封闭(Blocking

2.7 一抗、二抗孵育(Antibody incubation)

2.7.1 一抗孵育(Primary antibody incubation)

2.7.2 二抗孵育(Secondary antibody inucubation)

2.7.3 注意事项

2.8 蛋白检测(Detection of proteins——显影

2.9 结果分析(Result Analysis

2.9.1 对照设计

2.9.2 内参

2.10 膜的重复利用(Membrane recovery)

2.10.1 膜解吸的方法

2.10.2 方法步骤

3 Western Blot常见问题分析

3.1 封闭液的选择

3.2 一抗的选择

3.3 优化抗原和抗体浓度的斑点杂交方法

3.4 电泳中的问题

3.5 Western blot 结果中背景高且不均匀

3.6 Western blot 结果中信号弱或无信号

3.7 Western blot 结果中背景较高

3.8 Western blot 结果中杂带较多

3.9 Western Blot 结果中无信号或显示信号弱

3.10 其它现象

3.11 安全问题

4 long8Western Blot产品汇总

4.1 蛋白抽提

4.2 蛋白定量

4.3 蛋白上样、电泳和染色

4.4 转膜及封闭

4.5 一抗、二抗孵育

4.6 显色




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